Obsah

• Hlavní rozdíl
• Southern Blotting vs. Western Blotting
• Srovnávací tabulka
• Co je Southern Blotting?
• Co je Western Blotting?
• Klíčové rozdíly
• Závěr

Hlavní rozdíl

Hlavní rozdíl mezi Southern Blotting a Western Blotting je v tom, že Southern Blotting je technika, která se používá k detekci specifického fragmentu DNA v daném vzorku, zatímco Western Blotting se používá k nalezení specifického proteinu v daném vzorku.

Southern Blotting vs. Western Blotting

Blotování je technika, kterou vědci používají k oddělení různých typů molekul od směsi nebo vzorku. V této technice se makromolekuly jako nukleové kyseliny (DNA a RNA) a proteiny ve směsi pohybují deskou gelu. Zde se budou drobné částice pohybovat rychleji než ty větší. Tyto molekuly jsou přitlačovány na povrch imobilizované membrány, která přenáší molekuly na membránu. Existují různé typy blotování na základě detekce specifického materiálu, tj. Southern blotting, northern blotting a western blotting. Southern blotting je typ blotování, který se používá k detekci DNA, zatímco western blotting se používá k nalezení proteinu. Southern blotting byl vyvinut Edwardem M. Southernem v roce 1975. Takže je znám jako Southern blotting. Na druhé straně, western blotting byl vyvinut skupinou George Stark na Stanford University v roce 1979. Toto jméno bylo zvyklé na zápas s southern blotting. Southern blotting se používá k nalezení specifické sekvence DNA, zatímco western blotting se používá k nalezení specifické aminokyselinové nebo proteinové sekvence.

Srovnávací tabulka

Co je Southern Blotting?

Southern blotting je nejstarší blotovací metoda, která byla dána Edwinem Southernem, pojmenovaným jako Southern blotting. Používá se k nalezení specifické sekvence DNA v daném vzorku nebo směsi. Kroky zahrnují během Southern blotting elektroforézu, přenos a detekci specifických sekvencí. DNA je nejprve fragmentována pomocí specifického restrikčního enzymu. Potom jsou požadované fragmenty DNA separovány gelovou elektroforézou. Tyto fragmenty jsou denaturovány pomocí alkalického roztoku, např. NaOH, atd. K oddělení dvou řetězců DNA. Tyto jednovláknové DNA fragmenty se poté přenesly na membránu procesem blotování. Tato membránově vázaná DNA je poté ošetřena značenou sondou. Tato sonda se připojí ke svému komplementárnímu řetězci na membránové DNA, který lze vizualizovat autoradiogramem atd.

Co je Western Blotting?

Metodu Western blotting vynalezla skupina George Starka na Stanfordské univerzitě, která se používá k identifikaci specifické sekvence aminokyselin v proteinu. To je také známé jako protein blot nebo imunitní blot. Kroky během westernového přenosu jsou elektroforéza, přenos a detekce specifických proteinů. Nejprve homogenizujte směs. Potom oddělte sledovanou molekulu pomocí elektroforézy. Přeneste tyto molekuly na membránu a pomocí specifické sondy identifikujte specifický protein.

Klíčové rozdíly

1. Technika, která se používá k nalezení specifické sekvence DNA v dané směsi, je známa jako Southern blotting, zatímco technika, která se používá k nalezení specifické aminokyselinové sekvence proteinu v dané směsi, je známa jako Southern blotting.
2. Southern blotting byl vyvinut Edwardem M. Southernem v roce 1975 tak, známý jak Southern blotting. Na druhou stranu, western blotting byl vyvinut skupinou George Stark na Stanford University v roce 1979.
3. Southern blotting se používá k nalezení specifické sekvence DNA. Naopak, Western blotting se používá k nalezení specifické aminokyselinové nebo proteinové sekvence.
4. Southern blotting funguje na principu hybridizace na druhé straně; westernový přenos funguje na principu imunodetekční metody nebo interakce antigen-protilátka.
5. Jednovláknová DNA nebo někdy RNA se používá jako sonda v Southern blottingu na druhé straně, v western blotování se jako sonda používají primární a sekundární protilátky.
6. Elektroforéza na agarózovém gelu se používá při Southern blotování, zatímco SDS PAGE / polyakrylamidový gel se používá k oddělení proteinů při westernovém přenosu.
7. Naproti tomu Southern blotting následuje postup kapilárního přenosu; Western Blotting následuje postup elektrického přenosu.
8. Během Southern blottingu musí být vzorek denaturován, zatímco během westernového blotování by měl být vzorek ve svém původním stavu.
9. Žádný krok, jako je blokování, není zapojen do jižního blotování na flip straně, během westernového přenosu jsou nespecifická protilátková místa blokována na nitrocelulózovém papíru pomocí sušeného mléka nebo hovězího sérového albuminu (BSA).
10. Běžné metody značení, které se používají při Southern blottingu, jsou použití chromogenních barviv nebo radioaktivního značení nebo fluorescenčního značení atd., Zatímco způsoby značení používané v westernovém přenosu jsou použití fluorescenčně značených protilátek nebo radioaktivních značek, chromogenních barviv nebo tvorby diaminobenzidinu atd.
11. Detekce světla, autoradiograf a změny barvy se používají jako metody detekce v jižním přenosu, zatímco metody detekce v západním přenosu jsou změny barvy a detekce světla atd.
12. Southern blotting se používá při detekci DNA, testování otcovství, prstokladu DNA, k identifikaci oběti, k identifikaci zločinců, k nalezení infekčních agens a k identifikaci mutace nebo přeskupení genu atd. Naopak, western blotting se používá k nalezení počtu proteinů v směs, aby se zjistila přítomnost HIV, virů a bakterií atd. v séru, aby se zjistily defektní proteiny a použily se jako definitivní opatření pro herpes, hepatitidu B, lymskou chorobu a Creutzfeldt-Jacobovu chorobu atd.

Závěr

Výše uvedená diskuse shrnuje, že Southern blotting je nejstarší technika blotování použitá k nalezení specifického segmentu DNA ve vzorku, zatímco western blotting byl objeven později a použit k identifikaci specifické sekvence aminokyselin nebo specifického proteinu.